la Stérilisation
Stérilisation
INTRODUCTION :
Le défi actuel est de faire face aux nouvelles maladies telles les infections hospitalières , l’apparition de nouvelles souches multiresistantes .Pour cela les laboratoires et centres de recherche, les universités (pédagogiques), analyses (médicales, contrôle), les hôpitaux, les cliniques , l'industrie pharmaceutique et agroalimentaire sont tenus à respecter la réglementation en matière de sécurité et d’hygiène et de contrôle de qualité notamment la mise en place de procédure de contrôle de la stérilisation pour se conformer a la réglementation qui devient de plus en plus exigeante (norme afnor,ISO … ). Parmi les différentes mesures de prévention, la destruction des microorganismes par stérilisation ( matériel) joue un rôle fondamental et occupe une place importante dans ces établissements car ils créent des déchets qui a leur tour peuvent être dangereux pour la santé.! Leur mauvaise gestion et non respect des règles
d’hygiène et de biosécurité peuvent générer de sérieux problèmes de santé pour le personnel , la population et l’environnement . les déchets surtout ceux à haut risque infectieux (tranchants et coupants par blessure) et les cultures de microorganismes qui représentent le plus haut potentiel de pollution microbienne et de transmission de maladies dangereuse.
Le sol et les nappes souterraines peuvent être contaminés par des métaux lourds et aux autres produits toxiques
qui pourraient entrer dans la chaîne alimentaire.…
Domaine d’application
La stérilisation est nécessaire pour tous les milieux de cultures, verrerie et matériels utilisées lors des manipulations et cultures des microorganismes dans les laboratoires, les hôpitaux (labo, blocs, soins…), les cliniques, l'industrie pharmaceutique et agroalimentaire …
DESTRUCTION DES MICRO-ORGANISME :
"La destruction des micro-organismes est indispensable lors de la préparation des milieux, du matériel à usage multiple par stérilisation et ainsi qu'avant le lavage ou l'élimination. Il est nécessaire de réduire au maximum le nombre de germes présents avant stérilisation par l'emploi de matériel propre et peu pollué pour une bonne stérilisation et ne pas contaminer les manipulateurs.
Il sera possible d'utiliser des méthodes plus variées et à effet plus durable (méthodes physiques ou chimiques). Aujourd’hui ils existent différentes méthodes pour les détruire soit complètement soit partiellement (industrie).
DESTRUCTION PARTIELLE :LA PASTEURISATION :
Est un procédé physique, qui détruit les micro-organismes, mais non pas les spores avec une température de 60° à 90°C (sans atteindre l’ébullition) pendant 15-30s, puis refroidissement brusquement à l'eau glacée ( 4°-10°C). Cette méthode est surtout utilisée pour la conservation des produits alimentaires ( lait, crème, bière, jus de fruits,...).
DESTRUCTION TOTALE : LA STÉRILISATION :
C’est la destruction totale de toute forme de vie inclus les spores et les prions . Elle comporte une chaîne de processus conduisant à la stérilité du matériel traité, définie par l’absence de micro-organismes viables sur ce matériel. Le but de la stérilisation d’un objet est donc la destruction irréversible de tous les micro-organismes présents dans ou sur cet objet. Il y a différentes méthodes de stérilisation : - Procédés physiques - Procédés chimiques
DEFNITION DE LA STERILISATION
Définition: D’après la norme AFNOR : La stérilisation, « c’est la mise en oeuvre d’un ensemble de méthodes et de moyens visant à éliminer tous les micro-organismes vivants de quelque nature que ce soit, portés par un objet parfaitement nettoyé».Elle est une opération permettant d'éliminer ou de tuer les micro-organismes d'un objet (bactéries, parasites, virus..), et confère à cette matière l'état stérile jusqu'à l'ouverture du conditionnement. En microbiologie, le but de la stérilisation est d'une part maîtriser les micro-organismes introduits dans le milieu d'étude, et d'autre part éviter la contamination du milieu extérieur et des personnes.
Plus la contamination initiale est faible, plus on a de chances d'avoir une stérilisation efficace. On ne stérilise que du matériel propre, sec et emballé.
LES TECHNIQUES DE STERILISATION :
La méthode physique :
Stérilisation par la chaleur
1.1. Chaleur sèche :
Chauffage direct :
FLAMBAGE Il s’agit d’effectuer trois ou quatre passages lents des objets à stériliser dans la flamme bleue du bec Bunsen afin de détruire à sa surface toute matière organique. Cette méthode est à utiliser pour les objets en verre ( pipettes, baguettes de verre...), pour certains objets en métal (anse , pince), extrémité de l'öse, extérieur des pipettes Pasteur et pipettes graduées, col des tubes à essai, tubes contenant des milieux de culture, erlenmeyers et flacons divers, étaloirs ... c’est une stérilisation extemporanée (immediate), une flamme bleue, la plus chaude, crée une zone de stérilité d'un diamètre d'environ 20 cm, afin de détruire à sa surface toute matière organique. elle ne convient pas pour le plastique
1.1.2. Stérilisation à air chaud :
Cette technique nécessite un stérilisateur à chaleur sèche appelée étuve, Poupinel ou four Pasteur.L’air, chauffé à une température donnée pendant un temps déterminé détruit les micro-organismes par carbonisation de leur matière organique. Le temps et la température sont les deux paramètres intervenant dans la stérilisation Pour détruire les spores et germes. Il faut emballer le matériel, Le conditionnement doit résister à une température élevée : le conditionnement métallique est le plus souvent utilisé( boite), papier, textile .
les récipients et tubes à col doivent être bouchés avec du coton cardé.
Ce procédé ne convient qu’aux objets et matériaux secs, résistant à des températures de 120 à 200 °C, Elle ne convient pas pour les objets en plastique ou en caoutchouc ou les objets délicats.
Paramètres : 140° / 4h00,160°/ 2h00 , 170°/ 1h00 et 180° / 30 min ( la plus utilisée ).
Applications: la verrerie, porcelaine et instruments métalliques. Elle ne convient pas pour les objets en matière plastique ou caoutchouc ou objets délicats. Avantages : Utilisation simple.
Conditionnement : •Boites métalliques •Sachets *papier
Inconvénients :-Incertitude concernant l'homogénéité de la température dans la cuve.
-Cycle long : 6 heures pour ouvrir la porte avant que la température soit redescendue à 50°.
-Détérioration des instruments.
Conservation: 1 mois
1.1.3. L’incinération:
Selon la loi française et des Etats-Unis, autorise l’incinération des déchets d’activités de soins. Elle est largement utilisée en Europe. En France, 87 % des déchets médicaux et de laboratoires sont incinérés. Avantages: Tout caractère infectieux est détruit puisque les déchets sont soumis à des températures élevées au delà de 850°C durant au moins deux secondes.
Chaleur Humide: Autoclavage
Principe de stérilisation à vapeur d'eau saturée
L'agent stérilisant est la HYPERLINK "http://fr.wikipedia.org/wiki/Vapeur_d%27eau" vapeur d'eau saturée sous pression. La chaleur associée à l'humidité provoque la destruction des germes en réalisant une dénaturation protéique par hydrolyse partielle des chaînes peptidiques provoquant la mort de ces derniers. C'est le mode de stérilisation le plus utilisé. La stérilisation par la chaleur humide au moyen de vapeur d’eau saturée est le procédé de stérilisation à recommander car le plus fiable et le plus facile à valider et à contrôler. Elle représente donc le premier choix pour le matériel résistant au vide, à l’humidité, aux températures et aux pressions élevées.
Paramètres : •Température •Pression •Temps Déroulement d'un cycle de stérilisation •Pour 121°: pression de 1 bar pendant 20 minutes •Pour 134° : pression de 2 bars pendant 10 minutes. •Puis séchage environ 20 min •Introduction d'air filtré pour retour à la pression atmosphérique.
Remarque : En cas de suspicion de contamination par des prions, le temps de contact sera de 18 min à 134 °C (ou 6 fois 3 min à 134 °C),
Applications : Cette méthode est utilisé pour les milieux de culture, matériel en caoutchouc, la verrerie, les instruments de prélèvement et le matériel après son utilisation.
*125° : •Verre •Porcelaine •Caoutchouc •certaines matières plastiques. * 134° : •Instrumentation •Linge
Elle ne convient pas pour les produits liquides délicats :milieu albumineux, lait, gélatine, ...
Préparation du matériau: • la verrerie est généralement bouchée au coton et recouverte de papier • les récipients contenant un milieu de culture seront remplis aux ¾ •les instruments métalliques sont déposés sur un plateau de boîtes spéciales
Avantages :•Excellent procédé, fiable •Cycle court : 1 heure 30 Conditionnement •Boites munies de filtres ou de soupapes •Feuilles de papier crêpé •Gaines et sachets (type A)
Conservation :•Sachets et gaines thermo-soudés : 3 mois •Conteneurs et feuilles : 1 mois.
AUTRES MÉTHODES:
1. Tyndallisation :
Cette technique ne détruit qu'une partie de la flore bactérienne. Ce n'est, en aucun cas, une technique de stérilisation. ELLE consiste en une série de 3 pasteurisations de 1h. à 70 - 80°C, séparées par un intervalle de 24 heures à température ambiante, ce qui permet la germination et la destruction des spores.
2. Ébullition :
Certains milieux de culture fragile ne supportant pas les temperatures élevées, on procède à une ebullition à 100°Cpendant 30 minutes qui suffit à détruire toutes les formes végétatives. Dans ces conditions les spores ne sont pas détruites : on peut améliorer à ce moment là l'efficacité de l'ébullition en ajoutant à l'eau des solutions salines concentrées ( augmentation du point d'ébullition) , ou en prolongeant la durée du chauffage.Cette méthode est à utiliser pour la stérilisation des produits liquides délicats : milieux albumineux, lait, gélatine, solutions concentrées de glucides ... L'ébullition n'est pas une méthode de stérilisation. Les formes sporulées des bactéries peuvent résister jusqu'à 8h30 à 100°C.
3. Stérilisation par filtration :
Cette méthode est utilisée pour les milieux sensibles à la chaleur exp: certains acides aminés aromatiques, vitamines, hormones de croissance, acides nucléiques et une bonne partie des antibiotiques. Dans certains cas le filtre ayant servi à stopper les micro-organismes peut être déposé sur un milieu de culture solide afin de permettre la multiplication des germes, ceci dans le but de procéder à leur dénombrement et à leur identification.
4. Stérilisation par radiations:
Les rayons ionisants entraînent une ionisation des protéines et des lésions de l’ADN qui ont un effet létal très rapide pour les bactéries. Deux types de rayons sont utilisés : les rayons gamma et les faisceaux d’électrons (accélérés par un générateur électrique). On peut par ce procédé stériliser en continu de gros volume Mais le coût et la complexité de l’installation, le fait réserver à l’industrie, essentiellement pour le matériel à usage unique.La stérilisation par les U.V. est utilisée au laboratoire pour la décontamination de l'air et des paillasses situées sous la hotte de protection : le rayonnement n'agit que de façon directe et sa pénétration est faible. Des instruments ou des récipients tels que les boîtes de Pétri peuvent être stérilisées de la sorte.
La méthode chimique :
1. Stérilisation par Immersion :
Dans certaines circonstances, les objets peuvent être stérilisés en les immergeant dans un produit chimiostérilisant, généralement une solution de glutaraldéhyde.pendant un temps déterminé. Ils sont ensuite rincés avec de l'eau distillée stérile avant d'être utilisés.Immersion dans une solution désinfectante
Les dispositifs médicaux peuvent être traités manuellement ou en machine par immersion dans une solution désinfectante, habituellement une solution d’acide peracétique ou de glutaraldéhyde. Etant donné que ce procédé peut uniquement s’appliquer à des objets non emballés et que son efficacité réelle ne peut être contrôlée, il doit être considéré comme aboutissant à une désinfection de haut niveau et non à une stérilisation du matériel.
2. Stérilisation au gaz :
2.1. A la vapeur-formaldéhyde : La stérilisation repose sur une double action, celle du gaz formaldéhyde d'une part ( HYPERLINK "http://www.hygienosia.com/site1/Q_A/formaldehyde.htm" bactéricide, fongicide, virucide et HYPERLINK "http://www.hygienosia.com/site1/Q_A/formaldehyde.htm" sporicide ),et celle de la vapeur sous pression subatmosphérique d'autre part à une température de 80°C, pendant un temps déterminé. Un pré vide est nécessaire. Etant donné que les différents paramètres (concentration en formaldéhyde, humidité, température, temps) sont liés entre eux, il n'est pas possible de donner de valeurs guides
2.2. Stérilisation à l’oxide d’éthylène
(C2H4O), /:Les procédés de stérilisation à l’oxyde d’éthylène doivent être réservés au matériel médical qui ne peut résister à des températures supérieures à 60 °C et ne peut donc être stérilisé à la vapeur d’eau saturée. L’oxyde d’éthylène pur comporte des risques importants d’explosion. Ces risques sont diminués lorsqu’il est en mélange avec le CO2.
2.3. - STÉRILISATION PAR LE PEROXYDE D'HYDROGENE :
C’est un procédé innovant utilisant le peroxyde d’hydrogène (H2O2) à basse température. Dans un vide poussé il est transformé en plasma par un champ éléctro-magnétique générant outre des ions et des électrons libres, de nombreux radicaux libres ( HO-, H O2) à très forte activité sporicide, et bactéricide. Le H2O2 se décomposant en eau et oxygène durant le passage en phase plasma, aucun résidu ne subsiste sur le chargement, de sorte qu’aucun traitement ultérieur n’est nécessaire. 